分光光度计的使用方法
1.使用仪器前,使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理。以及各个操作旋钮之功能。在未接通电源前,应该对仪器的安全性进行检查,电源线接线应牢固。通地要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确,然后再接通电源开关。仪器在使用前先检查一下,放大器暗盒的硅胶干燥筒(在仪器的左侧),如受潮变色,应更换干燥的蓝色硅胶或者倒出原硅胶,烘干后再用。 2.将灵敏度旋钮调置“1”档(放大倍率zui小)。
3.开启电源,指示灯亮,选择开关置于“T”,波长调至测试用波长。仪器预热20分钟。
4.打开试样室盖(光门自动关闭),调节“0”旋钮,使数字显示为“00.0”,盖上试样室盖,将比色皿架置与蒸馏水校正位置,使光电管受光,调节透过率“100%”旋钮,使数字显示为“100.0”。
5.如果显示不到“100.0”,则可适当增加微电流放大器的倍率档数,但尽可能置低倍率档使用,这样仪器将有更高的稳定性。但改变倍率后必须按(4)重新校正“0”和“100%”。
6.预热后,按(4)连续几次调整“0”和“100%”,仪器即可进行测定工作。 7.吸光度A的测量按(4)调整仪器的“00.0”和“100%”,将选择开关置于“A”,调节吸光度调零旋钮,使得数字显示为“.000”,然后将被测样品移入光路,显示值即为被测样品的吸光度值。
8.浓度C的测量:选择开关由“A”旋置“C”,将已标定浓度的样品放入光路,调节浓度旋钮,使得数字显示为标定值,将被测样品放入光路,即可读出被测样品的浓度值。
9.如果大幅度改变测试波长时,在调整“0”和“100%”后稍等片刻,(因光能量变化急剧,光电管受光后响应缓慢,需一段光响应平衡时间),当稳定后,重新调整“0”和“100%”即可工作。
10.每台仪器所配套的比色皿,不能与其它仪器上的比色皿单个调换。 11.本仪器数字表后盖,有信号输出0~1000MV,插座1脚为正,2脚为负接地线。
吸收池(即比色杯)使用注意事项:
② 严禁用手指触摸透光面,因指纹不易洗净。严禁用硬纸和布擦拭透光面,只能使用镜头纸和绸布。
③ 严禁加热烘烤。急用干的杯子时,可用酒精荡洗后用冷风吹干。决不可用超声波清洗器清洗。
④ 吸收池的校正:要固定参比杯和样品杯,可在杯的毛玻璃面上写上记号。用盛有参比液的参比杯和样品杯测定吸光度“A0”,样品杯换上样品液后测定的吸光度为“A1”,则校正后的实际吸光度A为:A= A1-A0 1. 分光光度法定义与应用
1.1 定义: 分光光度法是利用物质所*的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的分析检测技术.
1.2 特点: 灵敏, ,快速和简便,在复杂组分系统中,不需要分离,即能检测出其中所含的极少量物质.
1.3 应用: 生物化学研究中广泛使用的方法之一,广泛用于糖,蛋白质,核酸,酶等的快速定量检测.
2. 分光光度计的基本结构和工作原理 2.1 分光光度计的分类 分光光度计的分类
红外分光光度计: 测定波长范围为大于760 nm的红外光区 可见光分光光度计: 测定波长范围为400~760 nm的可见光区 紫外分光光度计: 测定波长范围为200~400 nm的紫外光区 2.2 分光光度计工作原理
人眼可见的光只占电磁波谱的很小—部分(400~760nm),它是一种频率较大的电磁波.电磁波按频率大小,从频率zui小的无线电波到频率zui大的γ-射线排成一列,即组成电磁波的波谱,如下图所示. 2.2.1 分光光度计的光谱范围
包括波长范围为400~760 nm的可见光区和波长范围为200~400 nm的紫外光区.不同的光源都有其*的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源.
钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的400~760nm波长的光谱,光通过三棱镜折射后,可得到由红,橙,黄,绿,蓝,靛,紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源.
氢灯的发射光谱:氢灯能发出185~400 nm波长的光谱,可作为紫外光光度计的光源.
2.2.2 物质的吸收光谱(1)