分光光度计的使用方法

1．使用仪器前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理。以及各个操作旋钮之功能。在未接通电源前，应该对仪器的安全性进行检查，电源线接线应牢固。通地要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再接通电源开关。仪器在使用前先检查一下，放大器暗盒的硅胶干燥筒（在仪器的左侧），如受潮变色，应更换干燥的蓝色硅胶或者倒出原硅胶，烘干后再用。     2．将灵敏度旋钮调置“1”档（放大倍率zui小）。
    3．开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波长调至测试用波长。仪器预热20分钟。
    4．打开试样室盖（光门自动关闭），调节“0”旋钮，使数字显示为“00.0”，盖上试样室盖，将比色皿架置与蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示为“100.0”。
    5．如果显示不到“100.0”，则可适当增加微电流放大器的倍率档数，但尽可能置低倍率档使用，这样仪器将有更高的稳定性。但改变倍率后必须按(4)重新校正“0”和“100%”。
    6．预热后，按(4)连续几次调整“0”和“100%”，仪器即可进行测定工作。     7．吸光度A的测量按(4)调整仪器的“00.0”和“100%”，将选择开关置于“A”，调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为“.000”，然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度值。
    8．浓度C的测量：选择开关由“A”旋置“C”，将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测样品放入光路，即可读出被测样品的浓度值。
    9．如果大幅度改变测试波长时，在调整“0”和“100%”后稍等片刻，（因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间），当稳定后，重新调整“0”和“100%”即可工作。
    10．每台仪器所配套的比色皿，不能与其它仪器上的比色皿单个调换。     11．本仪器数字表后盖，有信号输出0～1000MV，插座1脚为正，2脚为负接地线。
    吸收池（即比色杯）使用注意事项：

② 严禁用手指触摸透光面，因指纹不易洗净。严禁用硬纸和布擦拭透光面，只能使用镜头纸和绸布。
    ③ 严禁加热烘烤。急用干的杯子时，可用酒精荡洗后用冷风吹干。决不可用超声波清洗器清洗。
    ④ 吸收池的校正：要固定参比杯和样品杯，可在杯的毛玻璃面上写上记号。用盛有参比液的参比杯和样品杯测定吸光度“A0”，样品杯换上样品液后测定的吸光度为“A1”，则校正后的实际吸光度A为：A= A1－A0 1. 分光光度法定义与应用 
1.1 定义: 分光光度法是利用物质所*的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的分析检测技术. 
    1.2 特点: 灵敏, ,快速和简便,在复杂组分系统中,不需要分离,即能检测出其中所含的极少量物质. 
    1.3 应用: 生物化学研究中广泛使用的方法之一,广泛用于糖,蛋白质,核酸,酶等的快速定量检测.  
2. 分光光度计的基本结构和工作原理      2.1 分光光度计的分类      分光光度计的分类 
    红外分光光度计: 测定波长范围为大于760 nm的红外光区      可见光分光光度计: 测定波长范围为400~760 nm的可见光区      紫外分光光度计: 测定波长范围为200～400 nm的紫外光区      2.2 分光光度计工作原理 
    人眼可见的光只占电磁波谱的很小—部分(400~760nm)，它是一种频率较大的电磁波.电磁波按频率大小,从频率zui小的无线电波到频率zui大的γ-射线排成一列,即组成电磁波的波谱,如下图所示.       2.2.1 分光光度计的光谱范围 
    包括波长范围为400~760 nm的可见光区和波长范围为200～400 nm的紫外光区.不同的光源都有其*的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源. 
    钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的400～760nm波长的光谱,光通过三棱镜折射后,可得到由红,橙,黄,绿,蓝,靛,紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源. 
    氢灯的发射光谱:氢灯能发出185～400 nm波长的光谱,可作为紫外光光度计的光源. 
    2.2.2 物质的吸收光谱(1)